Das Enzym Aminoacyl-tRNA-Synthetase verbindet die richtige Aminosäure mit ihrer tRNA.

Die richtige Aminosäure wird von einem spezifischen Enzym, der Amnioacyl-tRNA-Synthetase, an ihre tRNA angekoppelt. Den Vorgang nennt man auch Aminoacylierung oder „Beladen“ der tRNA.

Entsprechend den 20 Aminosäuren gibt es auch 20 Aminoacyl-tRNA-Synthetasen.

Alle tRNAs, welche die gleiche Aminosäure tragen, werden auch von dem gleichen Enzym beladen, obwohl ihre Sequenzen (einschließlich des Anticodons) unterschiedlich sind.