Spaltung von DNA mit Restriktionsenzymen






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Die Schritte des Experiments
Schritt 1: Schneiden der DNA
Die DNA wird mit jedem Enzym einzeln und mit allen möglichen Zweierkombinationen geschnitten.

Spur

  1. pUeb x BglII
  2. pUeb x BstEII
  3. pUeb x BglII und BstEII
  4. pUeb x EcoRV
  5. pUeb x BglII und EcoRV
  6. pUeb x BstEII und EcoRV
  7. Lambda x HindIII: Fragmente aus 23130, 9416, 6557, 4361, 2322, 2027 und 564 Basenpaaren
(Das Fragment aus 125 Basenpaaren läuft meist aus dem Gel heraus oder ist so schwach, dass man es nicht sieht.)



Schritt 2: Gelelektrophorese
Die Restriktionsansätze werden zusammen mit dem Marker durch Agarosegelelektrophorese analysiert.

Schritt 3: Sichtbarmachen der Banden
Um die Banden sichtbar zu machen, färbt man das Gel und fotografiert es.

Schritt 4: Längenbestimmung der DNA-Fragmente
Aus den Werten für den Marker konstruiert man eine Kalibrierungskurve; dann misst man die Wanderungsstrecke der Banden der experimentellen Ansätze und errechnet mit Hilfe der Kalibrierungskurve die Fragmentgrößen. Die Ergebnisse trägt man in eine Tabelle ein:

Ergebnisse der Spaltung
 1 2 3 4 5 6
 BglII  BstEII  BglII + BstEII  EcoRV  BglII + EcoRV  BstEII + EcoRV
 7666 7666 6008 4729  4729 4016


1658 2937 1992 2937




945 713

Die Analyse: 1. Restriktionskarte für BglII und BstEII


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